Histoloji için Doku Örnekleri Nasıl İşlenir?

 Histoloji için doku örneklerinin hazırlanmasında çok sayıda adım vardır. Sabit doku basitçe alınıp gömülemez. Bu makale, histoloji için doku işlemenin aradaki aşamasına odaklanmaktadır. Bu altı adım, doku fiksasyonu ile gömme veya kesit alma işlemleri arasında gerçekleşir.

HİSTOLOJİ İÇİN DOKU İŞLEMEDE ALTI ADIM

ADIM 1: KASETLERİ ETİKETLEME

Fiksasyondan sonra doku örnekleri bir doku kasetine aktarılır. Bunlar çeşitli boyutlarda gelir. İşlem sırasında dokuyu tutar ve korurlar. Gömme aşamasına ulaşıldığında, kaset kapağı kaldırılır. Kasetin birincil kısmı, parafin mumu bloğu için bir taban oluşturur. Kasetlerin elle veya bir kaset etiketleme makinesi kullanılarak uygun şekilde etiketlenmesi gerekir. Doku işlemedeki üç adım, dehidrasyon, temizleme ve sızmayı içerir. Bu adımların her biri, çözeltinin dokuya yayılmasını ve önceki çözeltinin dağıtılmasını içerir.

ADIM 2: CROUSEL MAKİNASI

Özel doku işleme makineleri, günümüzün modern laboratuvarlarının ve enstitülerinin çoğunda histoloji için doku işleme gerçekleştirir. Daha eski makineler, kasetlerin yerleştirildiği bir kafes içeren bir atlıkarıncaya benzer şekilde tasarlandı. Atlıkarınca içinde, cam beherler, dokunun kurutulmasını, temizlenmesini ve parafin mumuna gömülmeye hazır olmasını sağlayan çözücüler ve solüsyonlar içerir. Döngü, her çözeltide kafesi çalkalar ve dehidrasyon ve temizleme yöntemindeki çeşitli çözeltiler arasında hareket etmeye devam eder. Modern işlemciler, çeşitli solüsyonlar haznenin içine ve dışına pompalanırken numuneleri tutan bir hazne içerir. Genellikle süreç yaklaşık altı saat sürer ve çoğu laboratuvar bunu bir gecede çalışacak şekilde ayarlar.

ADIM 3: SUYU ÇIKARIN

Önce doku örneklerinin kurutulması gerekir. Su dokuya bağlı veya serbest olabilir. Parafin mumu hidrofobiktir, bu nedenle dokuya mum sızmadan önce suyun çıkarılması gerekir. Su, dokuyu bir dizi etanol solüsyonuna daldırarak gerçekleştirilir. Çözelti serisi, %100 susuz alkol elde edilene kadar artan konsantrasyonlarda etanol içerir. Artan konsantrasyonlar dokudaki suyun yavaş yavaş alkol ile yer değiştirmesini ve dokunun bozulmasını önlemesini sağlar. İşlem sırasında hücrenin bazı bileşenleri çıkarılır.

ADIM 4: ETANOL BALMUMU  İLE KARIŞTIRILMAZ

Doku etanolde dehidrasyonun son aşamasına ulaşsa bile, doğrudan mum gömme işlemine geçemez. Etanol ve balmumu karışmaz. Doku temizliği gereklidir. Temizleme, kullanılan solventleri ifade eder. Yüksek bir kırılma indeksine sahiptirler. Doku çözücülere daldırıldığında berrak ve şeffaf hale gelir.

ADIM 5: Temizleme Ajanları

Ksilen, ara aşamada kullanılan bir çözücüdür. Bu temizleme maddesi hem parafin mumu hem de etanol ile karışabilir olduğu için kullanılır. Dehidrasyondan sonra doku, yavaş yavaş etanolün yerini alana kadar ksilen solüsyonlarına daldırılır. Doku gömüldükten sonra ksilen, erimiş parafin mumu ile değiştirilir. Bu aşamalar sırasında doku küçülebilir çünkü ksilen doku örneklerinde kalan yağ kalıntılarını da giderir.

ADIM 6: DOKU BLOK

Son aşamaya engelleme veya sızma denir. Sızma sırasında, son ksilen dokuya sızan erimiş mum ile değiştirilir. Doku örneğinde hiçbir temizleme maddesinin kalmadığından emin olmak için üç farklı mum daldırma kullanılır. Son infiltrasyondan sonra, doku kasetleri kasetlerden çıkarılır ve erimiş mum ile doldurulmuş metal bir kalıba yerleştirilir. Kalıp soğuk plakaya aktarılır ve sertleşmesine izin verilir. Doku ayarlandıktan sonra kesit alma, slayt yapma ve immünohistokimya yolculuğuna hazırdır.

SONUÇ OLARAK

Doku örneklerini histoloji için uygun şekilde hazırlamak için gerekli birçok adım vardır. Doku örnekleri arasında tutarlılığı sağlamak için adımlar, herhangi bir sapma olmadan belirli bir sırayla gerçekleştirilmelidir.

Referans

https://webpath.med.utah.edu/HISTHTML/HISTOTCH/HISTOTCH.html

https://www.leicabiosystems.com/knowledge-pathway/an-introduction-to-specimen-processing/

https://bitesizebio.com/13398/how-histology-slides-are-prepared/

https://www.researchgate.net/publication/233844919_Routine_Histotechniques_Staining_and_Notes_on_Immunohistochemistry