GENOMLINE

Bugün sizlere süspanse hücre kültürünü anlatacğım. Öncelikle hücrelerimiz K562 ve sağlıklı hücreler. K562,kronik myeloid lösemi hücre hattıdır. Hücreler süspansedir ve yuvarlaktır. Bcr/abl füzyon geni için pozitiftir ve hem farklılaşmanın granülositlere  hem de eritrositleri proteomik olarak benzerlik taşımaktadır. Bu hücreler adeziv/adherent hücre olmdıkları için tripsine ihtiyaç duymadan herhangi bir kimyasal ve fiziksel etkiye bağlı kalmadan kolayca 50ml falcın tüplerimize aktarıyoruz.  -1200rpm 5dk santrifüjlüyoruz daha sonra süpernatant atılır, Pelet kısmı daha iyi kalkması için pıt pıtlanır. -Hücrelern olduğu 50ml falcon tüplerine 1 ml veya peletin durumuna göre 2-3 ml %10 RPMI (ortam ) ekliyoruz. İyice pipetaj yapıyoruz hücreler eşit bir şekilde dağılmasını sağlıyoruz - hücre sayımına geçiyoruz hücreleri 96 well plate bir kuyucuğuna 50ul hücre+50ul tripan blue ekliyoruz. Hücrelerimizi ışıklı mikroskop altında thoma lamında sayıyoruz  N x DF x 10.000 =1 ml deki hücre sayısını ver

 Hücre kültürü, hücrelerin kontrollü koşullar altında, genellikle doğal ortamlarının dışında büyütüldüğü süreçtir. İlgili hücreler canlı dokudan izole edildikten sonra, dikkatlice kontrol edilen koşullar altında muhafaza edilebilirler. Bu koşullar her hücre tipine göre değişir, ancak genellikle temel besinleri (amino asitler, karbonhidratlar, vitaminler, mineraller), büyüme faktörleri, hormonlar ve gazları (CO2, O2) sağlayan bir substrat veya ortam içeren uygun bir kaptan oluşur ve fizyo-kimyasal ortamı düzenler (pH tamponu, ozmotik basınç, sıcaklık). Çoğu hücre bir yüzey veya yapay bir substrat (yapışkan veya tek katmanlı kültür) gerektirirken, diğerleri kültür ortamında (süspansiyon kültürü) serbest yüzerek büyütülebilir. Çoğu hücrenin ömrü genetik olarak belirlenir, ancak bazı hücre kültürü hücreleri, optimal koşullar sağlandığında süresiz olarak çoğalacak olan ölümsüz hücrelere “dönüştürüldü”. Uygulamada, "hücre kültürü" terimi, bitki doku kültürü, mantar kültürü ve mikro