GENOMLINE

Bugün sizlere süspanse hücre kültürünü anlatacğım. Öncelikle hücrelerimiz K562 ve sağlıklı hücreler. K562,kronik myeloid lösemi hücre hattıdır. Hücreler süspansedir ve yuvarlaktır. Bcr/abl füzyon geni için pozitiftir ve hem farklılaşmanın granülositlere  hem de eritrositleri proteomik olarak benzerlik taşımaktadır. Bu hücreler adeziv/adherent hücre olmdıkları için tripsine ihtiyaç duymadan herhangi bir kimyasal ve fiziksel etkiye bağlı kalmadan kolayca 50ml falcın tüplerimize aktarıyoruz.  -1200rpm 5dk santrifüjlüyoruz daha sonra süpernatant atılır, Pelet kısmı daha iyi kalkması için pıt pıtlanır. -Hücrelern olduğu 50ml falcon tüplerine 1 ml veya peletin durumuna göre 2-3 ml %10 RPMI (ortam ) ekliyoruz. İyice pipetaj yapıyoruz hücreler eşit bir şekilde dağılmasını sağlıyoruz - hücre sayımına geçiyoruz hücreleri 96 well plate bir kuyucuğuna 50ul hücre+50ul tripan blue ekliyoruz. Hücrelerimizi ışıklı mikroskop altında thoma lamında sayıyoruz  N x DF x 10.000 =1 ml deki hücre sayısını ver